При локальных капельных стрептококковых инфекциях материалом для исследования является мокрота, носо-глоточная слизь, гной, полоскательные смывы, раневое отделяемое, при распространенных формах инфекционного процесса - кровь и моча.

Для лабораторного анализа используются микроскопический, бактериологический и серологический методы диагностики.

Назначение, особенности и диагностическая ценность микроскопического исследования такие же, как и при стафилококковых инфекциях.

1. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Для выделения чистой культуры стрептококков важное значение имеет создание оптимальной питательной среды, так как стрептококки предъявляют к ней особые требования. Им необходимо значительное количество углеводов и нативного белка. Поэтому наряду с общепринятыми сахарным МПБ, кровяным МПА, молочно-солевым МПА и МПБ (см. рецепты выше) при стрептококковых инфекциях применяются асцитические и сывороточные среды.

АСЦИТИЧЕСКИЙ МПБ И МПА готовятся с добавлением отчетной жидкости, получаемой стерильно из брюшной полости больных терапевтического и хирургического профиля. Жидкость прогревают 3 дня при +56-58 °C по 1 часу, стерилизуют фильтрованием через фильтр Зейтца или добавляют 40% глицерина и хранят на холоду. Для приготовления асцит-бульона и асцит-агара 1 часть жидкости смешивают с 2-3 частями МПБ (или Хоттингеровского бульона) или растопленного и остуженного МПА.

СЫВОРОТОЧНЫЙ МПБ готовят из простого свежего мясопептонного бульона с pH 7,6, к 1 части которого добавляют 2 части свежей сыворотки человека или лошади. Сыворотку перед прибавлением к среде инактивируют при + 56 °C в течение 30 минут.

При осложнении капельных стрептококковых инфекций сепсисом необходим и посев крови. Для бактериологического исследования крови Э. Г. Кассирская рекомендует комплексное использование трех видов питательных субстратов, засеваемых из расчета 1 часть патологического материала на 10-15 частей среды. В качестве последней используются 0,2% полужидкий агар с 10% асцитической жидкости, бульон Левинталя с кровью и печеночная среда Китт-Тароцци.

ДЛЯ БУЛЬОНА ЛЕВИНТАЛЯ отдельно готовят следующие компоненты: № 1 - к 100 мл мясного фарша добавляют 300 мл дистиллированной воды и 10 мл нормального раствора соды; № 2 - 0,5 г панкреатина растворяют в 20-30 мл воды с 2 мл 1 N раствора соды и 10 мл хлороформа; № 3 - буферный раствор фосфорно-кислого натрия в дистиллированной воде (разведение 8:1000). С помощью раствора НСl устанавливают pH, равное 5,6-6.

В первый день смесь № 1 инкубируют в термостате при + 37 °C 1-2 часа, добавляют к ней раствор № 2, перемешивают и при тех же условиях выдерживают еще 24 часа. Сосуд со средой периодически встряхивают. После этого берут равные количества мясной кашицы и буферного раствора № 3. Кипятят, фильтруют. Устанавливают рН-7,2-7,4. Вновь кипятят. Разливают по пробиркам и стерилизуют 2 дня подряд по 30 минут текучим паром.

СРЕДУ КИТТ-ТАРОЦЦИ готовят из говяжьей печени или мяса. Последние нарезают кусочками, взвешивают, заливают тройным количеством МПБ (рН-7,4-7,6) кипятят 30 минут. Затем бульон фильтруют, кусочки печени отмывают водопроводной водой. Далее пробирки с 3-4 кусочками печени, залитыми 7-8 мл фильтрата и слоем вазелинового масла, стерилизуют под давлением 1 атм. в течение 30 минут.

Высеваемость стрептококков возрастет при использовании ПОЛУЖИДКОГО АГАРА ГАРОЦЦИ: в бульон Мартена (рН-7,6-7,8) добавляют 0,3-0,5% глюкозы и 0,1-0,15% агар-агара. В стерильные пробирки помещают кусочки печени или вареного мяса, добавляют по 9 мл среды и стерилизуют при температуре +120 °C в течение 30 минут.

Зеленящий стрептококк, выделяемый при септическом эндоркардите, развивается очень медленно. В связи с этим посевы крови выдерживают 2-3 суток в термостате.

В некоторых случаях выделить культуру стрептококка при широкой аэрации не удается. Более успешным оказывается применение анаэробиоза. Для создания последнего можно использовать три простейших способа.

I. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ ЗАСЕВАЮТ В ПРОБИРКУ с 0.25% глюкозным бульоном и быстро всасывают его в стерильные пастеровские пипетки, концы которых тотчас же запаивают над пламенем горелки. Пипетки устанавливают вертикально в термостате. Через 24 часа нижние концы пипеток отламывают (стрептококки растут только внизу), первые капли используют для микроскопии и дальнейшего выделения чистой культуры возбудителя.

2. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ПОСЕВОВ В АТМОСФЕРЕ, НАСЫЩЕННОЙ УГЛЕКИСЛЫМ ГАЗОМ. Необходимую концентрацию СО 2 получают при добавлении в загруженный пробирками эксикатор вначале 1г двууглекислой соды на 1 литр объема, а затем из того же расчета 8-9 мл 10% Н 2 SO 4 или HCl.

3. ДОВОЛЬНО ПРОСТ и менее эффективен следующий прием: на дно неплотно закрытого эксикатора ставят зажженную свечку. Она горит 1-3 минуты и гаснет. По окончании первой или второй процедуры эксикаторы покрывают крышками, края которых смазаны вазелином и помещают в термостат.

Выделение чистой культуры

Биохимическая активность стрептококков непостоянна и ее выяснение не имеет диагностического значения. Изучение стрептококков в этом плане используется лишь для дифференциации с энтерококками (табл. 1.).

Таблица 1. Дифференциация стрептококков от энтерококков
Критерии Шермена для различия стрептококков группы А (истинные) oт группы Д (энтрококки)
Тесты	Группы
	Группа А (стрептококки)	Группа Д (энтерококки)
Длина цепочек	длинные (5-12 звена)	короткие (1-2 звеньев)
Рост на солевом МПА с 6,5%	+	-
Рост на желчно-кровяном МПА Д. Э. Беленького к П. Н. Поповой	-	+
Рост на молоке с метиленовой синькой	-	+ (редукция)
Рост на МПБ с pH - 9,6 (в присутствии 0,05 М р-ра Na 2 CO 3)	-	+
Чувствительность к пенициллину	+	-
Термоустойчивость при +60 °C в течение 30 минут.	-	+

Состав дифференциально-диагностических сред, применяемых для этой цели следующий.

• ЖЕЛЧНЫЙ И ЖЕЛЧНО-КРОВЯНОЙ МПА Д. 3. Беленького и Н. Н. Поповой готовятся из расплавленного и отфильтрованного 3% МПА с любой бульонной основой. К 60 мл этого МПА добавляют 40 мл нативной профильтрованной желчи, разливают по флаконам и стерилизуют при давлении в 1 атм. 30 минут. Для приготовления агара с кровью к этому желчному МПА добавляют 5% дефибринированной крови.
• МОЛОКО С МЕТИЛЕНОВЫМ СИНИМ приготовляется из обезжиренного стерильного молока, к 100 мл которого добавляют 2 мл 10% водного раствора метиленового синего.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИРУЛЕНТНОСТИ СТРЕПТОКОККОВ

Для доказательства патогенности стрептококков важное значение имеют гиалуронидазная активность, выявление стрептокиназы или фибринокиназы, плазмокоагулазы, лейкотоксическое действие стрептококка, наличие гемолизина. Определение этих показателей осуществляется по методикам, описанным выше, но выявление гемолизирующей активности стрептококка лучше идет на средах с человеческой кровью.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛЕЙКОЦИДИНА. Берут цитратную кровь человека или какого-либо животного, центрифугируют, верхний желтый слой лейкоцитов отсасывают пипеткой, переносят в другую пробирку и готовят 2-5% лейкоцитарную взвесь. Последнюю разливают по 1-1,5 мл в узкие пробирки. Сюда же вносят 1 петлю 1-2 млрд. суточной культуры стрептококка и на 1 час помещают в термостат при +37 °C. После инкубации, из лейкоцитарно-микробной массы делают мазки (по типу мазков из цельной крови), высушивают, фиксируют 15 мин. в смеси Никифорова, окрашивают 45-60 минут по Романовскому-Гимза, микроскопируют. Массовое разрушение лейкоцитов свидетельствует о наличии лейкоцидина.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ выделенных культур к лекарственным веществам производится общепринятыми способами.

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ТИПИЗАЦИЯ обнаруженных стрептококков после их изоляции требуется только для особых эпидемиологических целей и применяется редко.

II. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ СТЕПТОКОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ

Ферменты вирулентности стрептококков (гиалуронидаза, фибринокиназа, плазмокоагулаза) и их токсины (например, гемотоксин) являются мощными антигенами, в ответ на действие которых вырабатываются соответствующие антитела: антигиалуронидаза, антистрептокиназа, антистрептолизин и т. д. По обнаружению этих антител можно диагностировать заболевание и фазу развития инфекционного процесса.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИСТРЕПТОЛИЗИНА (АНТИГЕМОЛИЗИНА)

Стрептолизин представляет собой разновидность гемотоксина. Его присутствие проверяют на эритроцитариой массе. В ответ на действие этого антигена в организме формируются антитела, способные нейтрализовать его гемолизирующую активность. При выявлении антистрептолизина необходимы: сыворотка больного с антистрептолизинами (антителами); стрептолизин (очищенный), стандартный, лиофилизированный; 5% взвесь кроличьих, бараньих или человеческих эритроцитов; фосфатный буфер для разведения сывороток и приготовления взвеси эритроцитов: в 1 л дистиллированной воды растворяют 7,6 NaCl, 3,17 г КН 2 Р0 4 и 1,81 г Na 2 HPO 4 , добавляют по каплям концентрированную NaОН и доводят pH до 6.5-6,7. Буферный раствор сохраняется в рефрижераторе при -4 °C 2-3 недели.

Определение антистрептолизина складывается из двyx этапов: первый - установление титра и рабочей дозы стандартного стрептолизина, второй - выявление и количественное определение антистрептолизина. Схемы их выполнения приводятся ниже.

Схема определения рабочей дозы стандартного стрептолизина
Компоненты в мл	Пробирки
	1	2	3	4	5	6	7
							(контроль эритроцитов)
Стрептолизин	0,6	0,7	0,8	0,9	1,0	1,1	-
Буферный раствор	0,9	0,8	0,7	0,6	0,5	0,4	1,5
Взвесь эритроцитов	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
В термостат на 15 минут при +37 °C, встряхнуть, снова в термостат на 30 минут.
Результат	-	-	-	-	гемолиз	гемолиз	-

Титром и рабочей дозой стрептолизина считается его минимальное количество, давшее четкий гемолиз эритроцитов. В данном примере они равны 1,0 мл.

В последнее время выпускается стандартный лиофилизированный стретолизин, на флаконе с которым и в приложенной инструкции указан способ разведения препарата для получения рабочей дозы. Такой стрептолизин обеспечивает хорошую повторяемость результатов.

Схема постановки реакции для определения антистрептолизина
Компоненты в мл	Пробирки
	1	2	3	4	Контроль
					5	6
					стрептолизина	эритроцитов
Буферный раствор	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
Сыворотка больного	1:50	1:100	1:200	1:400	1:800	-
Стрептолизин в раб. дозе.	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	-
Встряхнуть, в термостат при + 37 °C на 15 минут.
Взвесь эритроцитов	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
В термостат на 45 минут при +37 °C с периодическими встряхиваниями.
Результат	-	-	гемолиз	гемолиз	гемолиз	-

Антистрептолизин в данной пробе сыворотки обследуемого больного обнаружен в титре 1:200.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИГИАЛУРОНИДАЗЫ

Принцип выявления основан на регистрации разрушительного действия фермента гиалуронидазы на гиалуроновый субстрат. Антитела сыворотки больного, направленные против этого фермента, нейтрализуют его и гиалуроновая кислота остается неизмененной.

Необходимые реактивы: сыворотка больного с антителами (антигиалуронидазой); экстракт гиалуроновой кислоты с известной рабочей дозой (способ описан выше); гиалуронидаза (химически чистый препарат); 15% уксусная кислота - индикатор; физиологический раствор.

Определение антигиалуронидазы состоит из трех этапов: первый - определение титра и рабочей дозы гиалуроновой кислоты, второй - гиалуронидазы, третий - выявление наличия и титра антигиалуронидазы.

Титрование гиалуронового субстрата описано выше. Титр и рабочая доза стандартной гиалуронидазы соответствует тому минимальному ее количеству, которое способно разрушить гиалуроновую кислоту, взятую в рабочей дозе.

После выяснения титра гиалуронидазы проводят определение титра антигиалуронидазы.

Схема постановки реакции определения титра сывороточной антигиалуронидазы
Ингредиенты в мл	Пробирки
	1	2	3	4	5	6	Контроль
							7	8
							гиалуронидаза	гиалуроновая кислота
Физ. раствор	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,7
Сыворотка больного в разведении 1:25	1:50	1:100	1:200	1:400	1:800	1:1600
Гиалуронидаза в рабочей дозе	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	-
В термостат при + 37°C на 30 минут.
Гиалуроновая кислота в рабочей дозе	0,3	0,3	0,3	0,3	0,3	0,3	0,3	0,3
В термостат при +37 °C на 30 минут. 15% уксусная кислота по 2-3 капли в пробирку.
Результаты	сгусток	сгусток	сгусток	-	-	-	-	сгусток

В данном примере титр антигиалуронидазы в сыворотке крови больного 1:200. Это количество антител при указанном разведении сыворотки еще обладает нейтрализующим действием в отношении гиалуронидазы и предотвращает разрушение гиалуроновой кислоты. Ее целостность регистрируется по образованию сгустка после добавления индикатора - 15% раствора уксусной кислоты.

1. Дяченко С. С. Микробиологические методы диагностики инфекционных заболеваний. Госмедиздат УССР, стр. 313.
2. Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных заболеваний. Изд. «Медицина», т. VI, разд. VI, стр. 440-474, 489-500 (энтерококки).
3. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней под ред. К. И. Матвеева и М. И. Соколова, стр. 450.
4. Сачков В. И. Иммунологические методы изучения ревматизма и других коллагенозных заболеваний. Медгиз, М., 1962.
5. Иоффе М. Ф. Иммунология ревматизма. Медгиз, М., 1961.

Источник : Мотавкина Н.С., Пьянова Р.Е. Микробиологическая диагностика некоторых капельных инфекций и токсоплазмоза. Методическая разработка для студентов. ВГМУ, 1973

Вперед >>>

2. Стрептококки

Относятся к семейству Streptococcaceae, роду Streptococcus.

Это грамположительные кокки, в мазках располагаются цепочками или попарно. Являются факультативными анаэробами. Не растут на питательных средах. На кровяном агаре дают мелкоточечные беспигментные колонии, окруженные зоной гемолиза: a – зеленящий, b – прозрачный. Заболевание чаще вызывается b-гемолитическим стрептококком. В сахарном бульоне дают придонно-пристеночный рост, а сам бульон остается прозрачным. Растут при температуре 37 °C. Стрептококки способны расщеплять аминокислоты, белки, углеводы. По биохимическим свойствам выделяют 21 вид. Большинство из них условно-патогенные.

Наибольшее значение в развитии инфекционных заболеваний имеют:

1) S. pyogenus, возбудитель специфической стрептококковой инфекции;

2) S. pneumonia, возбудитель пневмонии, может вызывать ползучую язву роговицы, отиты, сепсис;

3) S. agalactia, может входить в состав нормальной микрофлоры влагалища; инфицирование новорожденных приводит к развитию у них сепсиса и менингита;

4) S. salivarius, S. mutans, S. mitis, входят в состав нормальной микрофлоры полости рта; при дисбиозе ротовой полости являются ведущими факторами в развитии кариеса.

Антигены стрептококков.

1. Экстрацеллюлярные – белки и экзоферменты. Это вариантспецифические антигены.

2. Целлюлярные:

1) поверхностные представлены поверхностными белками клеточной стенки, а у S. pneumonia – белками капсул. Они вариантспецифичны;

2) глубокие – тейхоевые кислоты, компоненты пептидогликана, полисахариды. Они группоспецифичны.

Факторы патогенности.

1. Комплексы тейхоевых кислот с поверхностными белками (играют роль адгезинов).

2. М-белок (обладает антифагоцитарной активностью). Это суперантиген, т. е. вызывает поликлональную активацию клеток иммунной системы.

3. OF-белок – фермент, который вызывает гидролиз липопротеидов сыворотки крови, снижая ее бактерицидные свойства. OF-белок важен для адгезии. По наличию или отсутствию этого белка выделяют:

1) OF+-штаммы (ревматогенные); входными воротами является зев;

2) OF-штаммы (нефритогенные); первичная адгезия на коже.

4. Ферменты агрессии и защиты:

1) гиалуронидаза;

2) стрептокиназа;

3) стрептодорназа;

4) протеазы;

5) пептидазы.

5. Экзотоксины:

1) гемолизины:

а) О-стрептолизин (обладает кардиотоксическим действием, сильный иммуноген);

б) S-стрептолизин (слабый иммуноген, не обладает кардиотоксическим действием);

2) эритрогенин (обладает пирогенным действием, вызывает парез капилляров, тромбоцитолиз, является аллергеном, встречается у штаммов, вызывающих осложненные формы инфекции, у возбудителей скарлатины, рожистого воспаления).

Специфической профилактики нет.

<<< Назад

Вперед >>>

Стрептококки. Общая характеристика

Термин Streptococcus морфологический и объединяет кокки, расположенные попарно или цепочками. Название представляет собой комбинацию из двух греческих слов — (скрученный, сцепленный) и «coccos» (ягода). Так назвал эти микроорганизмы известный хирург Theodor Billroth в 1874 году.

Род Streptococcus имеет определенные биохимические характеристики. Так, включенные в него кокки ферментируют глюкозу с образованием большого количества молочной кислоты. В то же время они значительно разнятся по культуральным свойствам и по патогенности. Некоторые могут вызывать смертельные заболевания, в то время как другие проявляют патогенную активность лишь при особых условиях. Среди них есть и непатогенные кокки. В целом, стрептококки ответственны за большее число различных болезней, чем другие микроорганизмы, и практически могут поражать любую часть тела.

Стрептококки могут быть патогенны для человека и низших животных. Некоторые из них являются сапрофитами молока и других повседневных продуктов.

Большое число исследований посвящено биологии стрептококков . Структура отдельных кокков изучена детально, так же как и их патогенные свойства.

Стрептококки. Морфологические и культуральные свойства.

Стрептококки (~ 1 мкм в диаметре) организованы в длинные и короткие цепочки. Длинные цепочки насчитывают до 50 и более клеток, короткие — 4-10. Внутри цепочек клетки часто располагаются попарно. Цепочки формируются, когда бактерии делятся в одной плоскости и остаются сцепленными. Стрептококки неподвижные, грамположительные, неспорообразующие бактерии. Некоторые штаммы способны образовывать капсулу, однако этот признак не является постоянным.

Большинство стрептококков растет в присутствии кислорода, но могут и не нуждаться в нем. Некоторые виды являются строгими анаэробами. Стрептококки хорошо растут на обогащенных средах. Видимые колонии появляются через 24-48 часов. Обильный рост можно получить при культивировании на среде с добавлением сыворотки (не гретой) или цельной крови. Стрептококки могут расти в молоке. Оптимальной температурой роста является температура тела человека, но могут расти и при температуре от 15°С до 45°С. Большинство видов не лизируются в присутствии желчи и не ферментируют инулин (полимер фруктозы). Все каталазо- и оксидазо- отрицательны.

Хорошо сохраняются в мокроте и других экскретах, в сухой крош — до нескольких месяцев. Разрушаются при температуре + 60°С в течение 15 минут. Растворы фенола, йода, спирт также губительны для стрептококка.

Стрептококки. Классификация

Стрептококки могут быть классифицированы по характеру роста на агаре с 5% крови (кровяной агар):

1. Альфа-гемолитические (вызывают неполный гемолиз) — колонии окружены зеленоватой зоной Str.viridans (зеленящий стрептококк);
2. Бета-гемолитические (вызывают полный гемолиз) — колонии окружены бесцветной прозрачной зоной гемолиза;
3. Гамма-стрептококки (негемолитические) — кровяной агар вокруг колоний не изменен.

Как правило:

1. Альфа-гемолитические стрептококки ассоциируются с вялотекущим хроническим процессом (инфекция синусов или одонтогенные абсцессы), однако они мот вызывать и более тяжелые процессы, например, подострый бактериальный эндокардит;
2. Бета-гемолитические стрептококки — являются более вирулентными и ассоциируются с острой воспалительной реакцией;
3. Гамма-стрептококки — непатогенны для человека.

Другая классификация, основанная на биохимических свойствах, подразделяет стрептококки на группы:

1. группа А — пиогенные (гноеродные) β-гемолитические стрептококки — серьезные болезнетворные агенты, способные вызвать разнообразные по проявлениям и тяжести течения заболевания, — от носительства до сепсиса, ревматизма и гломерулонефрита.

2. группа Б — зеленящие стрептококки . Не вырабатывают гемолизинов, не вызывают гемолиз на кровяном агаре. Зеленящие стрептококки являются представителями нормальной микрофлоры дыхательных путей человека и вызывают развитие болезни только тогда, когда они попадают на измененные сердечные клапаны, на мозговые оболочки или в мочевыводящую систему. Они также широко распространены в природе.

3. группа В — энтерококки (Str.faecalis). Являются частью нормальной микрофлоры пищеварительного тракта людей и животных. Они могут вызывать заболевания при попадании в мягкие ткани, кровеносное русло, мочевыводящую систему или на мозговые оболочки. Энтерококки довольно устойчивы ко многим антибактериальным препаратам, но сохраняют чувствительность к пенициллинам.

4. группа Г — молочные стрептококки . Редко вызывают заболевания. Обычно присутствуют в молоке и обусловливают естественное «скисание» молока.

5. группа Д — пептострептококки. Строгие анаэробы, которые участвуют в возникновении смешанных инфекций, сопровождающих повреждения органов брюшной полости, таза и легких. Встречаются среди нормальной микрофлоры толстого кишечника и полости рта.

Существует еще одна классификация , основанная на различиях в структуре полисахарида клеточной стенки. Была предложена в 1920 году Лендсфилд (Lancefield). Полисахарид стрептококка (так называемый С — углевод) имеет существенные антигенные различия в структуре аминогруппы, определяемые в реакции преципитации. По этому признаку Лендсфилд выделила 13 групп: А, В, С, D, Е, F, G, Н, К, L, М, О, S.

В 90% случаев заболевание человека вызывают стрептококки группы А (β -гемолитические стрептококки), к которым относится Str. pyogenes (гноеродный стрептококк). Стрептококки этой группы имеют так называемый М-белок — главный фактор вирулентности, защищающий их от фагоцитов хозяина. М-белок определяет типовую специфичность стрептококков внутри группы А. Он локализован в поверхностном слое клеточной стенки (ворсинчатый слой). На основе различий в антигенной структуре М-белка группа А поделена на более чем 60 сероваров.

Токсические свойства, вырабатываемые β-гемолитическим стрептококком группы А

Стрептококки вырабатывают много внеклеточных веществ, включая ферменты и токсины. Среди них: гемолизины, лейкоцидины, стрептокиназа, стрептодорназа, гиалуронидаза, эритрогенный токсин.

Стрептолизины. Стрептококк вырабатывает два типа стрептолизинов — S и О, и каждый является лейкоцидином и гемолизином. Стрептолизин S продуцируют преимущественно стрептококки группы А. Стрептолизин О — группы А и некоторых других групп.

Прозрачная зона, образующаяся вокруг колоний стрептококка — это результат комбинированного действия обоих гемолизинов. Стрептолизин О чувствителен к кислороду и хорошо растворим в воде (диффундирует в среду), поэтому он действует под колонией, в толще агара, где условия анаэробные. Напротив, стрептолизин S устойчив к кислороду и потому вызывает поверхностный гемолиз. Поскольку стрептолизин О (но не S) обладает иммуногенными свойствами, антитела к нему (анти-О стрептолизин) являются следствием стрептококковой инфекции и их определение используется в диагностике.

Титр антистрептолизина О (ASO) в сыворотке более 160-200 ЕД считают патологически высоким. Это указывает или на недавно перенесенную стрептококковую инфекцию или на хронический процесс.

Стрептокиназа (фибринолизин) активатор фермента, расщепляющего фибрин и другие белки (основные белки сгустков крови). Свертывание крови играет важную роль в заживлении ран, так как оно ограничивает распространение местной инфекции. Стрептокиназа, являясь важным фактором вирулентности, благодаря своему прямому действию способствует распространению инфекции к возникновению генерализованных форм.

Стрептодорназа (стрептококковая дезоксирибонуклеаза, ДНК-аза) разжижает густой, вязкий экссудат, образующийся при пневмонии. Ферментная активность ДНК-азы связана со способностью к дефадации в экссудате дезоксирибонуклеопротеина — фактора, ответственного за вязкость.

Гиалуронидаза (фактор распространения, инвазии). Под действием этого фермента повышается проницаемость тканей хозяина для кокков и их токсических продуктов.

Эритрогенный токсин . Вызывает появление сыпи, которая наблюдается при скарлатине. Скарлатину могут вызвать только те штаммы, которые вырабатывают эритрогенный токсин. Эритрогенный токсин вырабатывают лизогенные стрептококки . Если штамма лишить фага (умеренного фагового генома), теряется способность вырабатывать токсин. Нетоксигенные стрептококки после лизогенной конверсии будут продуцировать эритрогенный токсин.

Эритрогенный токсин обладает антигенной активностью, вызывая у людей образование специфического антитоксина, который нейтрализует токсин. У людей, имеющих в организме антитела к эритрогенному токсину (антитоксины), сыпь не образуется, хотя они остаются восприимчивыми к стрептококковой инфекции.

Стрептококки. Патогенез и клиника инфекции

Типичное патологическое повреждение, вызванное гемолитическим стрептококком — распространенный целлюлит. Экссудат содержит немного клеток и состоит преимущественно из жидкости, содержащей незначительное количество фибрина. Токсические продукты, выделяемые микробами, помогают стрептококкам преодолевать как неповрежденные ткани, так и воспалительные барьеры. При этом проявляется тенденция к инфицированию лимфатических сосудов поражаемой стороны (регионарных). Большинство хорошо известных форм стрептококковой инфекции есть проявление целлюлита. Рожистое воспаление — это целлюлит специфической области (поверхностные слои кожи крыльев носа и носогубной складки, а также других участков кожи), септическая инфекция глотки (ангина) есть целлюлит глотки.

Иммунологические реакции организма следуют обычно за стрептококковой инфекцией (чаще, ангиной). Например, острая ревматическая лихорадка — осложнение ангины, вызванной стрептококками группы А; одна из форм заболеваний почек (гломерулонефрит) следует за стрептококковой инфекцией верхнего отдела респираторного тракта или кожи. Со стрептококковыми инфекциями связано множество различных патологических процессов.

Заболевания, обусловленные инвазией β-гемолитического стрептококка группы А ( Str . pyogenes )

Входные ворота инфекции определяют основную клиническую картину, однако в каждом случае имеет место вовлечение в процесс окружающих тканей с распространением по лимфатическим путям. Возбудитель может попасть в кровоток, что и приводит к развитию бактериемии.

Сюда относятся:

Флегмона. Входные ворота инфекции — кожа. Флегмона — это глубокое, быстро развивающееся заболевание, сопровождающееся воспалением и интенсивным покраснением, припухлостью и болезненностью. Очень быстро в процесс вовлекается лимфатическая система. Лимфатические протоки воспаляются и заметны в виде красных полос, направленных к ближайшим лимфоузлам. Поверхностной формой флегмоны является ржа (рожистое воспаление), воспаление на лице, чаще поражены крылья носа и носогубные складки (крылья бабочки). Может поражаться кожа других участков тела.

Послеродовая лихорадка (пуэрперальный сепсис). Входные ворота — эндометрий. Если после родов в латку проникает (5- гемолитический стрептококк группы А, раздевается послеродовая лихорадка, которая, «о существу, является септицемией, исходящей из инфицированной раны — эндометрия.

Раневая инфекция . Инфицирование травматических или операционных ран β — гемолитическим стрептококке группы А.

Все описанные процессы могут привести к развитию стрептококкового сепсиса.

Болезни, связанные с местным инфицированием β-гемолитическим стрептококком группы А

Стрептококковая ангина. Наиболее частое проявление стрептококковой инфекции. Вирулентные стрептококки группы А прикрепляются к эпителию гортани, благодаря наличию на поверхности пилей липотейхоевой кислоты.

У грудных детей и у детей младшего возраста заболевание протекает в виде назофарингита с небольшим количеством серозного отделяемого и невысокой температурой, но с тенденцией к распространению возбудителя в среднее ухо, сосцевидные отростки и на мозговые оболочки. Шейные лимфоузлы обычно увеличены. Заболевание может продолжаться в течение нескольких недель.

У детей старшего возраста и взрослых заболевание протекает более остро и характеризуется интенсивным назофарингитом, тонзиллитом, сильным покраснением и отеком слизистых, гнойным отделяемым, увеличенными и болезненными шейными лимфоузлами и (обычно) с высокой температурой.

Если инфицирующие штаммы стрептококка продуцируют эритрогенный токсин, а у больного антитоксический иммунитет отсутствует, появляется скарлатинозная сыпь. Антитоксин к эритрогенному токсину предупреждает появление сыпи, но не оказывает влияния на стрептококковую инфекцию.

Стрептококковый назофарингат обычно не распространяется на легкие. Пневмония, вызванная β — гемолитическим стрептококком, чаще всего является следствием вирусных инфекций, например, гриппа или кори, которые, по-видимому, значительно повышают восприимчивость к инфекции.

Стрептодермия (пиодермия стрептококковая, impetigo contagiosa) — высокозаразное поражение кожи. Болезнь чаще встречается у детей, часто обусловлена ассоциацией двух микроорганизмов — стрептококка и стафилококка.

Чувствительную кожу маленьких детей стрептококки заселяют, обычно не проникая во внутренние ее слои. Если же происходит инвазия в кожу, развивается заболевание, называемое импетиго. Оно имеет весьма характерную картину. Вначале формируются маленькие пузырьки, заполненные прозрачной жидкостью, хорошо отграниченные от остальных участков кожи. Прорываясь и подсыхая, они покрываются корочкой с медовой окраской в центре и красноватой по периферии. На коже рук или ног ребенка может быть до 20 таких элементов. При присоединении стафилококка элементы нагнаиваются. Impetigo contagiosa у детей часто осложняется развитием гломерулонефрита.

Инфекционный эндокардит.

Во время бактериемии стрептококки могут поселяться на нормальных или ранее поврежденных сердечных клапанах. Наиболее опасно поражение, вызываемое β -гемолитическим стрептококком группы А, сопровождающееся быстрым разрушением клапанов.

После экстракции зубов ~ у 30% пациентов развивается бактериемия, вызванная зеленящим стрептококком — обычным обитателем верхних дыхательных путей. Если при этом у больных имеются изменения в тканях клапанов сердца (вследствие ревматизма или атеросклероза), этот стрептококк может вызвать, так называемый, подострый бактериальный эндокардит.

Стрептококки. Осложнение инфекции (ревматизм, гломерулонефрит)

После острой инфекции, вызванной β — гемолитическим стрептококком группы А, наблюдается латентный период продолжительностью 1-4 недели, после которого иногда развивается ревматизм или нефрит. В формировании этих процессов имеет значение состояние гиперчувствительности, развитие аутоиммунных реакций, образование иммунных комплексов, повреждающих почечные клубочки.

Нефриту чаще предшествует поражение кожи, ревматизму — инфекции дыхательных путей.

Гломерулонефрит развивается у некоторых больных через 3 недели. Он может начинаться отложением комплексов антиген+антитело на основной мембране клубочков. При остром нефрите появляются кровь и белок в моче, отеки, повышается кровяное давление, отмечается задержка азота. В большинстве случаев наблюдается выздоровление, но у некоторых больных болезнь переходит в хронический гломерулонефрит с последующей почечной недостаточностью.

Ревматизм является наиболее серьезным осложнением инфекции, вызванной β-гемолитическим стрептококком группы А. Некоторые стрептококки содержат антиген клеточной стенки, перекрестно реагирующий с сарколеммой человеческого сердца. У больных образуются антитела к стрептококку, которые могут действовать цитотоксически на клетки сердца.

Началу ревматизма предшествует инфекция, иногда не распознанная, но часто — тяжелая стрептококковая ангина. Симптомами служат лихорадка, недомогание, артрит и признаки воспаления эндокарда, миокарда и перикарда.

Ревматизм проявляет тенденцию к обострениям. Поражения сердца прогрессируют при повторных атаках.

Стрептококки. Иммунитет к инфекции

Устойчивость к β-гемолитическому стрептококку является типоспецифической. То есть человек, который выздоровел после инфекции, вызванное одним типом стрептококка, является относительно не восприимчивым к повторному заражению тем же типом, но полностью чувствительным к инфицированию другим.

Развитие резистентности связано с типоспецифическими антителами к М-белку стрептококка. Белок М препятствует фагоцитозу, однако в присутствии антител против М-белка, лейкоциты вызывают гибель стрептококка.

Иммунитет протии эритрогенного токсина обусловлен наличием в крови антитоксина. Этот антитоксический иммунитет предупреждает развитие сыпи при скарлатине, но не защищает от стрептококковой инфекции.

Антитела к стрептолизину О (антистрептолизины) появляются после инфекции, но они не указывают на невосприимчивость. Высокие титры антистрептоадзина (более 250 ЕД) указывают на свежие или повторные инфекции, либо обнаруживают чаще у больных ревматизмом, чем у больных со стрептококковыми инфекциями, протекающими без осложнений.

Стрептококки. Чувствительность к антибиотикам

Штаммы β-гемолитического стрептококка чувствительны к пенициллину и, в большинстве случаев, к эритромицину. Крайне важен подбор оптимальной (бактерицидной или бактериостатической) дозы препарата и продолжительности его применения. При острой стрептококковой инфекции (ангине) продолжительность лечения пенициллином или эритромицином, в соответствующей дозе, не должна быть меньше 10 дней. Возможно применение других антимикробных препаратов после определения чувствительности к ним стрептококка.

Стрептококки. Источники инфекции. Механизм передачи. Меры профилактики

Многие стрептококки (зеленящие, энтерококки и др.) являются представителями нормальной микрофлоры тела человека. Они могут вызвать заболевание только в тех случаях, когда поселяются там, где их быть не должно (например, на сердечных клапанах). Для предупреждения таких случаев, особенно при хирургических вмешательствах, лицам с деформацией клапанов сердца целесообразно назначать антибактериальные препараты.

β-гемолитический стрептококк — это патогенный микроб. Его источником является человек, у которого может быть клинически выраженная или субклиническая инфекция, либо носительство. Микроб может передаваться аэрогенно, с каплями влаги из верхних дыхательных путей, или из очагов поражения на коже (раневая инфекция, стрептодермия) при прямом контакте либо через зараженные предметы. Распространенный вариант передачи — через руки носителей из числа больничного персонала, особенно при возникновении раневой инфекции и послеродового сепсиса. Минутного касания бывает достаточно, чтобы вызвать опасную стрептококковую инфекцию у больных или персонала.

Таким образом, основной источник — носители, выделяющие β- гемолитический стрептококк со слизистой носа или ротовой полости, либо больные разными формами стрептококковой инфекции.

Меры борьбы относятся преимущественно к инфекциям, вызванным β-гемолитическими стрептококками группы А и направлены на первое звено инфекционного процесса — источник инфекции.

Эти меры предполагают:

Выявление и раннее интенсивное антибактериальное лечение больных адекватными дозами препаратов (преимущественно пенициллин, эритромицин и другие антибиотики, активные в отношении грамположительных микроорганизмов).

Санация носителей, то есть освобождение от стрептококка мера необходимая в отношении носителей из числа персонала родильных домов, хирургических стационаров. Очень трудная процедура, не всегда успешная. Иногда приходится удалять носителя из зоны повышенного риска для пациентов.

Стрептококки. Лабораторная диагностика инфекции

Для постановки диагноза при острых стрептококковых инфекциях (за исключением скарлатины с клинически выраженными симптомами) необходимо проведение бактериологических и серологических исследований.

При септических состояниях производят посев крови; при гнойных поражениях высевают отделяемое ран, язв, делают посев со слизистых оболочек. Если рана или язва покрыта гноем, его предварительно смывают изотоническим раствором хлорида натрия, материал для посева берут из глубины. Во всех случаях удобнее всего пользоваться ватным тампоном. Тампон помещают в стерильную пробирку и отправляют в лабораторию, где с него производят посев на питательные среды, содержащие кровь или сыворотку. При посеве материал накосят на поверхность среды легкими штрихами, не втирая его в агар.

Наиболее высокий процент высеваемости стрептококка может быть получен при погружении тампона с материалом (у постели больного) в пробирку с полужидким агаром с 2-3 каплями дефибринированной крови на дне. Материал инкубируют 3-4 часа при 37°С и производят посев на чашку с кровяным агаром.

Посев крови производят в жидкие среды с последующим высевом на кровяной агар. Посевы крови должны длительно (до 2-х месяцев) сохраняться в термостате, т.к. в некоторых случаях, в частности при лечении антибиотиками, рост микробов наблюдается только через 1,5-2 месяца. В течение этого времени периодически делают высевы на чашки с кровяным агаром.

На следующий день изучают выросшие колонии. Для дальнейшего исследования отбирают мелкие, плоские колонии диаметром до 1-2 мм, прозрачные, сероватою цвета, окруженные зоной гемолиза или зеленоватой зоной. Готовят мазки, окрашивают их по Граму. Под микроскопом видны грамположительные кокки, располагающиеся короткими цепочками. Оставшийся от микроскопического исследования материал колонии, пересевают на скошенный сывороточный или асцитический агар.

С целью идентификации выделенной культуры производят" посев на скошенный мясопептонный агар, молоко с метиленовым синим, бульон с желчью.

β — гемолитический стрептококк группы А не растет на простых средах, на средах с желчью, не редуцирует метиленовый синий в молоке. Энтерококк хорошо растет на простых средах с желчью.

Биохимические свойства стрептококков определяют путем посева на среды Гисса, но они не являются достаточно постоянными. Целесообразно изучать биохимические свойства стрептококков при отсутствии у них группового С-антигена.

Определение серологической группы стрептококка по Лендсфилд производят с помощью реакции преципитации, в которой используют групповые сыворотки (А, В, С, D) и солянокислый экстракт, полученный из испытуемой культуры стрептококка и содержащий группоспецифический С-антиген. Для этого в 4 преципитационные пробирки вносят по 0,2 мл антистрептококковых сывороток. В пятую (контрольную) пробирку вносят 0,2 мл нормальной кроличьей сыворотки. Затем во все пробирки осторожно наслаивают равный объем испытуемого солянокислого экстракта. При положительном результате на границе жидкостей появляется четко выраженное кольцо молочно-белого цвета.

Определение серовара стрептококка имеет значение при эпидемиологическом анализе для выявления источника инфекции. Серовар стрептококка может быть установлен с помощью реакции агглютинации на стекле по методу Гриффитса (реакция между Т-антигеном и Т-антителами) или в реакции преципитации по Лендсфилд (реакция между М-антигеном и М-антителами). Определение серовара проводят только в группе А.

Серологические методы широко применяются при подтверждении диагноза ревматизма, гломерулонефрита. В сыворотках крови больных обнаруживают антитела к О-стрептолизину, гиалуронидазе и другим ферментам агрессии стрептококков. При острых стрептококковых инфекциях также происходит нарастание титра антител к О — стрептолизину и ферментам стрептококка, однако увеличение титра антител наблюдается лишь через 1-2 недели после начала заболевания, поэтому с помощью серологических методов диагноз может быть поставлен ретроспективно.

Заключение

— Стрептококки обладают значительным набором культуральных свойств и признаков патогенности. Они ответственны за большее число болезней и большее их разнообразие, чем любая другая группа микроорганизмов. Они могут быть причиной первичных болезней и вторичных осложнений. Могут поражать любую часть тела человека и низших животных. Некоторые из них являются сапрофитами и содержатся в каждодневных продуктах.

— Пенициллин до сих пор является препаратом выбора, действующим на β-гемолитический стрептококк.

— По характеру роста на кровяном агаре стрептококки подразделяются на дающие полный (β) гемолиз, неполный (α) гемолиз и негемолитические (γ). Согласно классификации по биохимическим свойствам стрептококки подразделяются на пиогенную (гноеродную) группу, зеленящую группу, молочные стрептококки и энтерококки, β-гемолитический Streptococcus pyogenes — это серьезный патогенный микроб.

— Согласно наиболее обоснованной классификации Lancefield, стрептококки подразделяются по антигенным свойствам С — субстанции (полисахарид) на 13 групп. Более 90% инфекций человека вызваны стрептококками группы А (по Lancefield).

— Наиболее важными экстрацеллюлярными ферментами и токсинами, продуцируемыми стрептококком, являются гемолизины, лейкоцидины, гиалуронидаза и эритрогенный токсин.

— Наиболее типичным для β-гемолитического стрептококка группы А проявлением болезни является диффузный, болезненный, отграниченный от окружающих тканей целлюлит. После инфекции, особенно ангины, может развиться иммунопатологическая реакция. Скарлатина, эпидемическая ангина и стрептодермия (impetigo contagiosa) должны рассматриваться как серьезные заразные болезни, вызываемые стрептококком.

— Зубной кариес обусловлен индивидуальной чувствительностью, развивающейся в ответ на присутствие в ротовой полости бактерий, продуцирующих органические кислоты, и углеводов, поддерживающих кариесогенную активность этих бактерий. К этим процессам имеет отношение Streptococcus mutans из группы зеленящих стрептококков.

Стрептококки (Streptococcus) впервые выделил из тканей людей, больных рожей, и при раневых инфекциях в 1874 г. Т. Бильрот, а описали при сепсисе Л. Пастер в 1879 г. и А. Огстон в 1881 г. Чистую культуру стрептококков выделили и изучили Ф. Фелейзен (1883) и А. Розенбах (1884).

Патогенные стрептококки у животных и человека заселяют слизистые оболочки, кожу и проявляют свою патогенность при снижении общей резистентности организма животного или отдельных тканей (при травме, ожоге и т. п.).

В естественных условиях стрептококки являются возбудителями заболеваний у крупного рогатого скота и лошадей, а также нагноительных процессов. У поросят и птиц вызывают септическое заболевание — стрептококкоз. Иногда обусловливают осложнения вирусных и бактериальных инфекций.

Антигены. Современная классификация основывается на определении антигенной структуры стрептококков, позволяющей подразделить все стрептококки на 17 серологических групп, обозначаемых латинскими буквами в порядке алфавита. Практический интерес представляют серогруппы А, В, С, D, E, F. Группа А — возбудители большого числа инфекций у человека; группа В — возбудители мастита у коров; группы В, С, D, Е — возбудители инфекций у животных разных видов. Антигеном, который позволяет разделить стрептококки на серогруппы, является полисахарид (С-вещество), входящий в состав клеточной стенки стрептококков.

Химическая природа стрептококковых антигенов неодинакова. В группе А ими являются белковые антигены М, R и Т.

Токсинообразование. Патогенные стрептококки продуцируют экзотоксины различного действия.

Гемолизин обусловливает разрушение эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, макрофагов; при внутривенном введении кроликам вызывает гемоглобинемию и гематурию.

Лейкоцидин разрушает лейкоциты или угнетает их фагоцитарные свойства.

Летальный токсин (некротоксин) при внут-рикожном введении кролику вызывает некроз. Некротическому действию могут подвергаться паренхиматозные органы и другие ткани.

Кроме экзотоксинов патогенные стрептококки продуцируют ферменты гиалуронидазу, фибринолизин, дезоксирибонуклеазу, рибонуклеазу, нейраминидазу, протеиназу, стрептокиназу, амилазу, липазу, а также эндотоксины, которые характеризуются термостабильностью. Экзотоксины, например, термолабильны: гемолизин инактивируется при температуре 55 "С в течение 30 мин, лейкоцидин — при 70 °С. Наиболее термоустойчив фибринолизин, не разрушающийся при кипячении до 50 мин.

Во збудитель мыта. Streptococcus equi открыл Щютц в 1888 г. Мыт — контагиозное заболевание преимущественно молодняка цельнокопытных животных (до двух лет), характеризующееся катарально-гнойным воспалением слизистой оболочки верхних дыхательных путей, подчелюстных и заглоточных лимфатических узлов.

Морфология. Мазки окрашивают по Граму и Романовскому— Гимзе. Для Str. equi в гное (мытный абсцесс, носовое истечение) характерно расположение длинными цепочками сплющенных в поперечнике кокков, в мазках из агаровой и бульонной культур возбудитель имеет вид коротких цепочек, иногда по два кокка. Капсул и спор не образует. Неподвижен. Величина кокков 0,6— 1,0 мкм. Грамположительный.

Культивирование. Для выделения чистой культуры проводят посев на сывороточно-глюкозный агар (на обычных средах не растет). Через 24 ч на агаре мытный стрептококк образует мелкие, просвечивающиеся, похожие на капельки росы колонии. Характерно слияние колоний между собой.

На кровяном агаре рост в виде мелких колоний с зоной /3-гемолиза. На свернутой кровяной сыворотке Str. equi образует стекловидные сероватые колонии. В сывороточном бульоне и среде Китта—Тароцци отмечается рост мелкими крупинками, выстилающими стенки и дно пробирки, бульон остается прозрачным.

Биохимические свойства. Мытный стрептококк не свертывает простое молоко, лакмусовое и метиленовое молоко не обесцвечивает (не редуцирует), не ферментирует лактозу, сорбит, маннит. Отсутствие ферментации названных углеводов позволяет дифференцировать мытный стрептококк от гноеродного (Str. pyogenes), который сбраживает лактозу, свертывает молоко, редуцирует метиленовую синь.

Токсинообразование. Выражено слабо.

Антигенная структура. Str. equi относят к серогруппе С. Они содержат полисахарид С, синтезируют экстрацеллюларные антигены (токсины), О — стрептолизин (белок) и S — стрептолизин (липидно-протеиновый комплекс). Все они способны вызывать разрушение эритроцитов.

Устойчивость. Во влажном гное сохраняется до 6 мес, в навозе — один месяц. При нагревании до 70 °С погибает в течение 1 ч, при 85 °С — за 30 мин. В качестве дезинфектантов используют 1 %-ный раствор формалина, 2 %-ный раствор гидроокиси натрия при экспозиции 10—30 мин.

Патогенность. Мытом болеет молодняк цельнокопытных животных, кошки и мыши. Стрептококки, попавшие на слизистую оболочку носа, лимфогенным путем достигают подчелюстных лимфатических узлов. Под влиянием кокков и их токсинов возникает воспаление слизистой оболочки, вначале серозное, а потом слизисто-гнойное.

Мытный стрептококк, выделенный непосредственно из гноя, вирулентен для жеребят, но культуры данного стрептококка, свежевыделенные на сывороточном или кровяном агаре, авирулентны. Токсинообразование выражено слабо. Причина этого явления не изучена.

Лабораторная диагностика. Патологический материал (слизистые истечения из носовых отверстий, гнойный экссудат или пунктат подчелюстных лимфоузлов), направленный в лабораторию, исследуют по общей схеме: микроскопия мазков; посев поступившего материала на питательные среды для выделения чистой культуры стрептококков и их идентификации; биологическая проба — на белых мышах, кошках, особенно на котятах. Последние гибнут от одной десятимиллионной дозы бульонной культуры при подкожном заражении в течение 3—10 дней.

Дифференциация. Выделенную культуру (чистую) можно идентифицировать при помощи мытного антивируса. В данном фильтрате Sir. equi не растет, а другие виды стрептококков растут. При атипичной форме мыта применяют РСК с мытным антигеном.

Мытный стрептококк в отличие от гноеродного стрептококка не ферментирует молоко, лактозу, сорбит, маннит (табл. 1).

табл. 1 Дифференциация стрептококков

Обозначения: «—» — не ферментирует; «+» — ферментирует.

Иммунитет и биопрепараты. Животные, переболевшие мытом, приобретают стойкий иммунитет (чаще всего пожизненный). Вакцины из убитых культур стрептококков не вызывают иммунитета. Не получила применения и противомытная сыворотка ввиду ее дороговизны.

В качестве специфического средства лечения применяют антивирус, который представляет собой фильтрат 20-суточной бульонной культуры Str. equi, изготовленный из местных штаммов стрептококка. Больным мытом животным препарат вводят подкожно в области верхней трети шеи в дозе 50—100 мл, в зависимости от массы и возраста животного. Инъекции лучше делать в нескольких местах. При отсутствии заметного эффекта антивирус вводят повторно через сутки или двое. Препарат можно применять для компрессов и "промывания абсцессов. При гиперплазии подчелюстных и околоушных лимфатических узлов антивирус вводят подкожно в области этих узлов.

Возбудитель мастита. Мастит у крупного рогатого скота вызывают различные микроорганизмы, но наиболее частым возбудителем является Streptococcus agalactiae (Streptococcus mastitidis).

Морфология. Str. agalactiae — мелкие, диаметром 0,5—l мкм, чуть сплющенные или овальные кокки, располагающиеся длинными цепочками (несколькими десятками кокков). В мазках из культур. выросших на плотных питательных средах, маститный стрептококк образует короткие цепочки. Спор и капсул не образует. Хорошо окрашивается всеми анилиновыми красками, грамположителен (цвет. табл. 1).

Культивирование. Маститный стрептококк — аэроб. На обычных питательных средах растет слабо. Хорошо культивируется на средах с добавлением дефибринированной крови или кровяной сыворотки. В сывороточном МПБ растет в виде мелкозернистого осадка, при этом среда остается прозрачной. На кровяном МПА образует мелкие (точечные) блестящие сероватые колонии’, окруженные зоной гемолиза (гемолиз 3-типа).

Чистую культуру стрептококка получают путем посева измененного секрета из пораженной доли вымени на кровяном MTIA в бактериологических чашках при суточном инкубировании при 37 °С с последующим пересевом типичной для данного микроба колонии на сывороточный мясо-пептонный бульон и кровяной агар.

Биохимические свойства. Маститный стрептококк не разжижает мясо-пептонный желатин и свернутую сыворотку, не обесцвечивает метиленовое молоко, лакмусовое молоко изменяет частично. Ферментирует с образованием кислоты глюкозу, лактозу, сахарозу, мальтозу, салицин. Не ферментирует сорбит и дульцит.

Для выяснения потенциальной гемолитической активности стрептококков мастита используют CAMP (КАМП) — метод, получивший свое название по первоначальным буквам фамилий австралийских исследователей: Кристи, Аткинс и Мунх-Петерсон.

Метод основан на усилении гемолитической активности стрептококка группы В в зоне, близкой к полосе гемолиза стафилококка на кровяном агаре; гемолитические, но утратившие или снизившие гемолитическую активность штаммы агалактииного стрептококка образуют заметную зону гемолиза вблизи стафилококка.

Токсинообразование. Маститный стрептококк продуцирует токсины: эритротоксин, гемолизин, некротоксин, лейкоцидин — и ферменты: фибринолизин и гиалуронидазу.

Антигенная структура. Str. agalactiae относят к серогруппе В.

Устойчивость. В высушенном гнойном экссудате сохраняется 2—3 мес. При нагревании до 85 °С погибает за 30 мин. Замораживание консервирует его. Чувствителен к окситетрациклину, полимиксину в сочетании с сульфадимезином.

3 %-ный раствор гидроокиси натрия, 1 %-ный раствор формалина обезвреживают маститный стрептококк через 10—15 мин.

Патогенность. Наиболее вирулентные стрептококки обнаруживают у коров, больных острым маститом. Гнойный экссудат из вымени таких животных в дозе 0,1—0,2 мл убивает мышей при внутрибрюшинном заражении в течение суток.

Лабораторная диагностика и дифференциация. Материалом для исследования служит молоко маститных коров, которое высевают на МПА, МППА и на кровяной агар.

Полученную культуру идентифицируют с учетом морфологических, культуральных, гемолитических свойств и по антигенной структуре, которую выясняют в реакции диффузной преципитации в агаровом геле или методом флюоресцирующих антител со специфическими сыворотками.

Иммунитет. Обусловлен антитоксическими и антибактериальными факторами.

Биопрепараты. Их нет. Для лечения используют антибиотики и сульфаниламиды, которые вводят через канал соска в молочную цистерну.

Гноеродный стрептококк. Str. pyogenes вызывает у животных абсцессы, артриты, флегмоны, эндометриты, а также септицемию. Возникновению гнойных процессов способствуют пониженная сопротивляемость организма, несвоевременная хирургическая обработка ран, несоблюдение правил асептики и антисептики, излишнее травмирование тканей при исследовании ран, гиповитаминозы и авитаминозы.

Морфология. В мазках Str. pyogenes представляет собой короткие цепочки, состоящие из 3—5 клеток. Хорошо окрашивается растворами обычных анилиновых красителей. Грамположителен. Спор и капсул не образует.

Культивирование. Хорошо растет на средах с глюкозой или сывороткой. На МПА растет в виде мелких круглых колоний; на кровяном агаре вокруг колоний Str. pyogenes образуется незначительная зона /3-гсмолиза. При росте в МПБ образует помутнение.

Биохимические свойства. Свертывает молоко, вызывает редукцию лакмусового молока, обесцвечивает метиленовое молоко. Ферментирует лактозу, сорбит, маннит.

Лабораторная диагностика. При бактериологическом исследовании материала (гнойный экссудат ран, абсцессов, асептически взятый экссудат, кровь — при подозрении на септицемию) готовят мазки. Для выделения чистой культуры Str. pyogenes проводят посев на питательные среды.

Биопрепараты. Методы активной иммунизации не разработаны. Лечение осуществляется с помощью антибиотиков, чаще в комбинации с сульфаниламидами, нитрофуранами, с помощью ферментов, стрептококкового бактериофага и др.

Возбудитель диплококковой инфекции. Str. pneumoniae был выделен в 1871 г. Л. Пастером из слюны ребенка, погибшего от бешенства. В чистой культуре пневмококки выделили в 1886 г. Френкель и Вексельбаум, которые установили роль пневмококка в этиологии крупозной пневмонии.

Пневмококки широко распространены в природе. У здоровых животных обнаруживаются на слизистых оболочках дыхательных путей, пищеварительного тракта, половых органов. У коров, овец, свиней, коз, лошадей вследствие нарушения зоотехнических норм содержания и неполноценного кормления в период беременности после родов скрытое носительство пневмококков переходит в клинически выраженное заболевание — развиваются маститы и эндометриты.

Телята, ягнята, поросята, заразившиеся от матерей, становятся источником возбудителя инфекции для остального молодняка, что приводит к развитию энзоотии. Заражение происходит через желудочно-кишечный тракт и дыхательные пути. Болезнь характеризуется септицемией, поражением легких (лобулярная пневмония) и желудочно-кишечного тракта.

Морфология. В мазках из патологического материала стрептококки овальной формы и располагаются попарно или короткими цепочками. При хронических процессах клетки имеют форму диплострептококка. Размеры клеток 0,8—1,25 мкм. В мазках из свежих культур преобладает диплококковая форма. Неподвижны. Спор не образуют.

В организме пневмококки образуют хорошо выраженную капсулу, которая утрачивается при культивировании на искусственных питательных средах, но сохраняется на средах с сывороткой или кровью.

Культивирование. Пневмококки размножаются в аэробных и анаэробных условиях при 36—38 °С и рН 7,2—7,6. Для их выращивания применяют среды, содержащие 0,5 % глюкозы и 5 % крови животных. На МПА образуют мелкие прозрачные колонии с голубым оттенком; в МПБ — помутнение; на сывороточном агаре появляются мелкие прозрачные колонии, напоминающие капельки росы. Колонии свежевыделенных культур диплококка на кровяном агаре мелкие, круглые, прозрачные, окруженные зоной а-гемолиза (зеленая зона), в полужидком агаре — хлопьевидный рост, в желатине — рост по уколу без разжижения.

Биохимические свойства. Ферментируют с образованием кислоты глюкозу, лактозу, сахарозу, маннит; не ферментируют арабинозу и дульцит; не образуют пигмента и индола.

Токсинообразование. На полужидком агаре с кровью и мальтозой продуцируют токсин, вызывающий смертельное отравление котят при пероральном введении.

Антигенная структура. В характеристике видовой специфичности имеет определенное значение нуклеопротеиновый антиген. который расположен в глубине цитоплазмы пневмококков. Ближе к поверхности клетки находится видоспецифический соматический полисахаридный С-антиген. На поверхности цитоплазмы находится типоспецифический протеиновый М-антиген.

Внутри вида Str. pneumoniae имеются 84 серовара, агглютинирующихся только соответствующими типовыми сыворотками.

Антигенная структура пневмококков под влиянием различных физических и химических факторов может быстро изменяться, что сопровождается формированием на агаре переходных, а затем шероховатых колоний, потерей капсул, вирулентности, гемолитических и иммуногенных качеств, а также повышением биохимической активности.

Устойчивость. Диплококк мало устойчив. Нагревание при 55 °С вызывает гибель культуры через 10 мин. Во внешней среде погибает в течение 3—4 нед. В качестве дезинфектантов используют формалин, гидроокись натрия, известь. Пневмококки легко подвергаются аутолизу вследствие высокой активности их внутриклеточных ферментов.

Патогенность. Наиболее чувствительны к пневмококкам белые мыши и кролики. Подкожное введение небольших доз культуры вызывает гибель мышей от септицемии в течение 12—36 ч. При заражении слабовирулентными культурами развиваются длительно протекающие хронические заболевания. Патогенными пневмококки являются также для крупного и мелкого рогатого скота, собак, крыс и других животных.

Диплококк патогенен для мышей, кроликов, поросят, ягнят, телят, а при введении в сосок молочной железы — для овец, свиней, коров.

Наиболее вирулентны свежие культуры пневмококка, выделенные из трупов молодняка, павшего от диплококковой инфекции (при токсикосептической форме). Токсины специфичны, т. с. нейтрализуются только противодиплококковой сывороткой.

Лабораторная диагностика. В лабораторию направляют трупы молодняка или паренхиматозные органы, трубчатые кости, суставы, кровь сердца в запаянных пипетках, головной мозг. При подозрении на диплококковый эндометрит или мастит у взрослых животных исследуют выделения из половых органов и молоко.

Диагноз ставят на основании микроскопического исследования выделения чистой культуры и результатов биопроб.

Биопробу ставят на белых мышах, которые после внутрибрюшинного или подкожного заражения гибнут через 16—48 ч.

Серологический метод. Стрептококковые антигены в крови выявляют в реакции связывания комплемента с иммунными кроличьими сыворотками (по В. И. Иоффе); в моче в реакции преципитации (по И. М. Лямперт). Определяют наличие антигиалуронидазы и антистрептолизина в крови для диагностики нефрита. О-Стрептолизин обладает способностью лизировать эритроциты кролика. В присутствии антител (анти-О-стрептолизины) в сыворотке лизиса эритроцитов не происходит.

Кроме того, для типизации диплококков используют реакцию агглютинации и метод иммунофлюоресценции, который позволяет выявить стрептококки в смешанной популяции микробов, если эту популяцию обработать флюоресцирующей антисывороткой к стрептококкам.

Иммунитет сопровождается скрытым носительством диплококков в организме животных.

Биопрепараты. Для специфической профилактики диплококковой инфекции используют полужидкую формолвакцину, противо-диплококковую сыворотку (К. П. Чепуров, 1950), поливалентную формолквасцовую вакцину против сальмонеллеза, пастереллеза и диплококкоза поросят (А. Г. Малявин, 1956).

Применяют пенициллин, биомицин, тетрациклин, окситетрациклин, полимиксин М, которые являются эффективными средствами против диплококков как при острых септических случаях, так и при подострых, хронических и осложненных пнев

Микробиология: конспект лекций Ткаченко Ксения Викторовна

2. Стрептококки

2. Стрептококки

Относятся к семейству Streptococcaceae, роду Streptococcus.

Это грамположительные кокки, в мазках располагаются цепочками или попарно. Являются факультативными анаэробами. Не растут на питательных средах. На кровяном агаре дают мелкоточечные беспигментные колонии, окруженные зоной гемолиза: a – зеленящий, b – прозрачный. Заболевание чаще вызывается b-гемолитическим стрептококком. В сахарном бульоне дают придонно-пристеночный рост, а сам бульон остается прозрачным. Растут при температуре 37 °C. Стрептококки способны расщеплять аминокислоты, белки, углеводы. По биохимическим свойствам выделяют 21 вид. Большинство из них условно-патогенные.

Наибольшее значение в развитии инфекционных заболеваний имеют:

1) S. pyogenus, возбудитель специфической стрептококковой инфекции;

2) S. pneumonia, возбудитель пневмонии, может вызывать ползучую язву роговицы, отиты, сепсис;

3) S. agalactia, может входить в состав нормальной микрофлоры влагалища; инфицирование новорожденных приводит к развитию у них сепсиса и менингита;

4) S. salivarius, S. mutans, S. mitis, входят в состав нормальной микрофлоры полости рта; при дисбиозе ротовой полости являются ведущими факторами в развитии кариеса.

Антигены стрептококков.

1. Экстрацеллюлярные – белки и экзоферменты. Это вариантспецифические антигены.

2. Целлюлярные:

1) поверхностные представлены поверхностными белками клеточной стенки, а у S. pneumonia – белками капсул. Они вариантспецифичны;

2) глубокие – тейхоевые кислоты, компоненты пептидогликана, полисахариды. Они группоспецифичны.

Факторы патогенности.

1. Комплексы тейхоевых кислот с поверхностными белками (играют роль адгезинов).

2. М-белок (обладает антифагоцитарной активностью). Это суперантиген, т. е. вызывает поликлональную активацию клеток иммунной системы.

3. OF-белок – фермент, который вызывает гидролиз липопротеидов сыворотки крови, снижая ее бактерицидные свойства. OF-белок важен для адгезии. По наличию или отсутствию этого белка выделяют:

1) OF+-штаммы (ревматогенные); входными воротами является зев;

2) OF-штаммы (нефритогенные); первичная адгезия на коже.

4. Ферменты агрессии и защиты:

1) гиалуронидаза;

2) стрептокиназа;

3) стрептодорназа;

4) протеазы;

5) пептидазы.

5. Экзотоксины:

1) гемолизины:

а) О-стрептолизин (обладает кардиотоксическим действием, сильный иммуноген);

б) S-стрептолизин (слабый иммуноген, не обладает кардиотоксическим действием);

2) эритрогенин (обладает пирогенным действием, вызывает парез капилляров, тромбоцитолиз, является аллергеном, встречается у штаммов, вызывающих осложненные формы инфекции, у возбудителей скарлатины, рожистого воспаления).

1) этиотропная терапия антибиотиками;